笃玛 犬免疫球蛋白E(IgE) ELISA 试剂盒

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犬免疫球蛋白E(IgE) ELISA 试剂盒
试剂盒性能
1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.  灵敏度:检测浓度小于1.0 pg/mL。
3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5.  贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6.  有效期:6个月

犬免疫球蛋白E(IgE) ELISA 试剂盒
试剂盒组成
名称         96孔配置      48孔配置    备注
微孔酶标板 12孔8条     12孔4条     无
标准品         0.3mL6管     0.3mL6管     无
样本稀释液 6mL       3mL     无
检测抗体-HRP 10mL       5mL     无
20洗涤缓冲液 25mL       15mL     按说明书进行稀释
底物A         6mL       3mL     无
底物B         6mL       3mL     无
终止液         6mL       3mL     无
封板膜         2张       2张     无
说明书         1份       1份     无
自封袋         1个       1个     无
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、7.5、15、30、60、120 pg/mL

犬免疫球蛋白E(IgE) ELISA 试剂盒
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.  样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
    
犬免疫球蛋白E(IgE) ELISA 试剂盒
酶联免疫试验步骤
     将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
     编    号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
     加样反应:加标准品或样本50μl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50μl/孔,再加入50μl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
      洗    涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250μl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
      显    色:每孔加入底物液A 50μl,再加底物液B 50μl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟(若蓝色过浅,可适当延长反应时间)。
      终    止:每孔加入终止液50μl,轻轻振荡混匀,终止反应。
      测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。